PCR 引物浓度计算器对于分子生物学家和技术人员来说是一个非常宝贵的工具。它自动计算 PCR 混合物中引物的最终浓度,确保最佳反应条件并最大限度地减少手动计算中出现错误的可能性。通过输入初始引物浓度、所用引物体积和总反应体积,计算器快速准确地提供最终浓度。
PCR引物浓度计算器公式
要了解计算器的工作原理,有必要了解它使用的公式:
![PCR 引物浓度](https://calculatorshub.net/wp-content/uploads/2024/05/PCR-Primer-Concentration-1.png)
其中:
- C1 是引物的初始(库存)浓度(微摩尔,μM)
- V1 是您将使用的底漆储备溶液的体积(以微升为单位,μL)
- C2 是 PCR 反应中引物的最终浓度(以 µM 为单位)
- V2 是 PCR 反应的最终体积(以 µL 为单位)
有用的换算表
这里有两个有用的表格,为常见的实验室转换和引物储备制备提供快速参考。这些将帮助研究人员快速执行必要的计算,无需单独的工具,确保 PCR 设置的效率和准确性。
表 1:常见实验室换算
从 | 至 | 转换系数 |
---|---|---|
纳摩尔 (nM) | 微摩尔 (μM) | 除以1,000 |
毫升 (mL) | 微升 (µL) | 乘以1,000 |
微克 (μg) | 纳克 (ng) | 乘以1,000 |
磨牙 (M) | 微摩尔浓度 (μM) | 乘以1,000,000 |
表 2:底漆稀释指南
该表有助于准备底漆原料的稀释液以达到所需的工作浓度。
库存浓度 (μM) | 所需工作浓度 (μM) | 最终体积 100 µL 的库存体积 (µL) |
---|---|---|
100 | 0.5 | 0.5 |
100 | 1.0 | 1.0 |
200 | 0.5 | 0.25 |
200 | 1.0 | 0.5 |
PCR 引物浓度计算器示例
- 库存溶液浓度(C1): 100 微米
- 所需的最终浓度 (C2): 0.2 微米
- 总反应体积(V2): 50μL
计算公式:V1 = (C2 * V2) / C1
应用值:V1 = (0.2 * 50) / 100
结果:V1 = 0.1 µL
说明:
- 将 0.1 µL 引物储备液添加到 PCR 反应中以达到所需的浓度。
最常见的常见问题解答
Q1:PCR的最佳引物浓度是多少?
A1:反应混合物中的最佳浓度各不相同,但通常在 0.1 至 0.5 µM 之间。
Q2:如果反应效率低下,如何调整引物浓度?
A2:如果PCR效率低下,请考虑在最佳范围内稍微调整引物浓度,或检查引物特异性和PCR条件。
Q3:我可以重复使用底漆进行多次 PCR 反应吗?
A3:是的,如果在 -20°C 下正确储存以防止降解,底漆库存可以重复用于多个反应。