この クローニングモル比計算機 分子生物学者や遺伝子工学者にとって不可欠なツールです。クローニング実験中にライゲーションを成功させるために必要なインサートDNAとベクターDNAの最適なモル比を決定するのに役立ちます。正確な比率を確保することで、この計算機はDNAアセンブリの効率を最大化し、時間を節約します。 時間 研究室のリソース。
このツールは、次のようなアプリケーションで特に役立ちます。
- 遺伝子クローニングと組み換え DNA 実験。
- タンパク質発現研究のためのベクター構築。
- 遺伝子スクリーニングのためのハイスループットクローニング。
クローニングの式 モル比計算機
インサート DNA とベクター DNA のモル比を計算する式は次のとおりです。
モル比 = 挿入 DNA のモル数 / ベクター DNA のモル数
各 DNA 成分のモル数を計算するには:
モル = 質量 (グラム) / モル質量 (g/mol)
壊す：
- 挿入DNAのモル数: DNA 挿入物の質量とモル質量から導出されます。
- ベクターDNAのモル数: ベクトルについても同様に計算します。
- 比: 結果の値は、ベクターと混合する挿入物の量をユーザーに指示します。
一般的なシナリオの事前計算された比率
ライゲーション実験で使用される一般的な挿入物とベクターの比率の表を以下に示します。
| 挿入DNAの質量（ng） | ベクターDNAの質量（ng） | 挿入:ベクターモル比 |
|---|---|---|
| 50 | 50 | 1:1 |
| 100 | 50 | 2:1 |
| 150 | 50 | 3:1 |
| 200 | 50 | 4:1 |
| 250 | 50 | 5:1 |
この表は、一般的な比率を簡単に参照できるようにし、繰り返し計算する必要がなくなります。
クローニングモル比計算機の例
連結反応のモル比を計算してみましょう。
- DNAを挿入: 100 ng、モル質量 = 2,000 g/mol。
- ベクターDNA: 50 ng、モル質量 = 3,000 g/mol。
ステップ 1: 挿入DNAのモル数を計算する:
挿入物のモル数 = 質量 / モル質量 = (100 × 10⁻⁹) / 2,000 = 5 × 10⁻⁸ モル。
ステップ 2: ベクターDNAのモル数を計算する:
ベクトルのモル数 = 質量 / モル質量 = (50 × 10⁻⁹) / 3,000 = 1.67 × 10⁻⁸ モル。
ステップ 3: モル比を計算します:
モル比 = インサートのモル数 / ベクターのモル数 = (5 × 10⁻⁸) / (1.67 × 10⁻⁸) ≈ 3:1。
モル比はおよそ 3:1 であり、これは最適な連結効率を得るための一般的な比率です。
最も一般的な FAQ
モル比は DNA ライゲーションの効率を決定します。不適切な比率ではライゲーションが不完全になったり、試薬が過剰に無駄になったりして、実験が失敗する可能性があります。
通常、インサートとベクターのモル比は 3:1 または 4:1 で、ほとんどのライゲーション反応に適しています。ただし、理想的な比率は DNA フラグメントのサイズとタイプによって異なる場合があります。
質量は大まかな推定値を提供しますが、DNA 断片の分子サイズを考慮するとモルを使用する方が正確です。これにより、ライゲーション反応の精度が向上します。